Forumet - [GY] Mikrobiologi och genetik - PCR-labb

[GY] Mikrobiologi och genetik - PCR-labb

251 0 3
Hej (:
Jag har en fråga här... När vi labbade på mikrobiologin för ett tag sen lyckades jag ha i väldigt mycket mer vatten än jag skulle i min lilla tub, och nu kan jag inte komma fram till vad det gjorde med mitt resultat.
(Nu tar jag kursen på engelska - går på en engelsk gymnasieskola - så det här kommer bli ganska fel rent språkligt sätt...)
Vår labb gick ut på att multiplicera en DNA-sekvens från kloroplasterna i en valfri grön växt. Vi följde labben från University of Reading.

Allt gick bra - jag tog fram mitt prov från den gröna paprikan jag använde, tvättade det två gånger med "purification reagent" och en gång med TE-1 buffer, men sen kom det till att blanda i alla primers:
Jag hade i 10 mikroliter vardera av Primer 1 och Primer 2 (jag kommer inte ihåg om vi fick veta vilka det var specifikt, men det står inte i instruktionerna), och sen skulle jag ha i 4 mikroliter destillerat vatten, men lyckades ha i 10 mikroliter istället. I samma tub hade vi en lite "kula" som bestod av Taq-polymeras, en ospecifierad buffer, dNTP och magnesiumklorid (ospecificerade proportioner). Sen tog vi reda på DNA-segmentets längd med hjälp av elektrofores, som gick som den skulle.

Det jag undrar nu är hur mitt totala fail med vattendosen påverkade mitt resultat? Jag hade ju helt fel koncentration polymeras, men hur ska jag räkna på det för att få fram hur mycket mitt resultat påverkades av den konstiga koncentrationen av allt pga den stora mängden vatten?

Jag fick 2.1 kB, om det spelar nån roll...

Tack-tack om du orkat läsa hela vägen hit (: nu kan du kanske svara också, så blir jag jätteglad ;)
Jag tror inte att många här på ungdomar.se är särskilt välbekanta med vad en PCR-laboration är. Jag gjorde dock en sådan i höstas (på läkarprogrammet). Att enzymkoncentrationen var lägre än den skulle bör väl rimligen påverka mängden kopior som åstadkoms. PCR brukar ju dock köras i många cykler, vilket alltså bör innebära att en försvarlig mängd ändå bildades. Det borde inte påverka elektroforesens resultat, eftersom den ju bara visar längden på sekvensen som kopierades.
met0xy:

Jag tror inte att många här på ungdomar.se är särskilt välbekanta med vad en PCR-laboration är.


Du kunde ju ;) Det räcker med bara en eller två, så jag tänkte att det inte kan skada att fråga iaf [crazy]

met0xy:

Det borde inte påverka elektroforesens resultat, eftersom den ju bara visar längden på sekvensen som kopierades.


OK, men va bra :D